1、容器的選擇：使(shi)用(yong)帶螺旋(xuan)蓋的2ml塑料(liao)安培瓶。

　　2、檢查安(an)培瓶(ping)是否滲(shen)漏：用(yong)0.05%的亞甲基藍水溶液(ye)在4℃浸泡30-45分鐘，沖洗(xi)干凈，棄去含有藍色染料的安(an)培瓶(ping)，其余的安(an)培瓶(ping)備用(yong)。

　　3、打印標簽(激光(guang)打印)。

　　4、容器的滅菌：先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶，再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鐘，干燥并將打印好的標簽放入安培瓶中，略擰緊螺旋蓋，再行121℃滅菌30分鐘。

　　5、保藏菌(jun)菌(jun)齡：處(chu)于**生長(chang)量階段或對數生長(chang)期后期。

　　6、保護(hu)劑：選(xuan)用5-10%的甘油或二甲基亞砜作保護(hu)劑。

　　1)甘油的(de)(de)準備(bei)：在121℃滅菌15分鐘，2-8℃貯存(cun)。甘油一般以兩倍*終所需濃度(du)(du)的(de)(de)水溶(rong)液保存(cun)，然后與同等量的(de)(de)細胞懸液混合(he)。若不用(yong)細胞懸液，則以*終所需濃度(du)(du)的(de)(de)水溶(rong)液保存(cun)。

　　2)二(er)甲基亞(ya)砜：用0.22um的聚四氟乙烯過(guo)濾膜過(guo)濾除菌。過(guo)濾膜預先用甲醇和(he)二(er)甲基亞(ya)砜漂洗。無菌的二(er)甲基亞(ya)砜以(yi)10-15ml裝量2-8℃避光保存。

　　7、分(fen)裝：在無(wu)菌條(tiao)件下(xia)，將細胞(bao)懸液(從平板上(shang)打(da)下(xia)直徑為5cm的菌塊)分(fen)裝于(yu)安培瓶中，并注(zhu)入保(bao)護(hu)劑，擰緊(jin)螺旋蓋。

　　8、將安培瓶固定在鋁夾上(shang)，貼好標簽。為了便于取用，一(yi)般一(yi)個鋁夾上(shang)僅放一(yi)個菌株。

　　9、將控(kong)溫(wen)(wen)(wen)系統先預冷到4℃，再將鋁夾(jia)放入其中。以(yi)每分鐘1℃降(jiang)溫(wen)(wen)(wen)至(zhi)-40℃，然后以(yi)每分鐘10℃降(jiang)溫(wen)(wen)(wen)至(zhi)-90℃。降(jiang)溫(wen)(wen)(wen)以(yi)后，將鋁夾(jia)轉移至(zhi)處于液氮中的儲(chu)存(cun)器(qi)中保存(cun)。

　　10、菌種的復活：將液氮保藏的菌種取出，迅速放(fang)入(ru)37℃水(shui)浴中解凍。一般需2至2.5分鐘(zhong),等解凍后，再及時轉接(jie)到合適的培養基中培養。